Was ein Certificate of Analysis wirklich aussagt

„Mit COA“ steht heute auf praktisch jeder Peptid-Website. Das Kürzel steht für Certificate of Analysis: ein Prüfbericht, in dem ein Labor festhält, was es gemessen hat. Es ist damit kein Siegel, das jemand verleiht, sondern ein Protokoll, das jemand erstellt, und die Qualität hängt vollständig davon ab, wer gemessen hat, was gemessen wurde und ob das Dokument überhaupt zu der Charge gehört, die man in der Hand hält.

Die fünf Angaben, ohne die ein COA wertlos ist

• Chargen- oder Lot-Nummer, die mit der Nummer auf dem Produkt übereinstimmt.
• Name des prüfenden Labors, mit Adresse und nicht nur ein Logo.
• Datum der Analyse.
• Angewandte Methode, in der Regel HPLC für die Reinheit und Massenspektrometrie für die Identität.
• Die Rohdaten oder zumindest das Chromatogramm, nicht nur eine Zahl im Fließtext.

Fehlt die Chargennummer, ist das Dokument nicht zuordenbar, denn es könnte zu jeder beliebigen Produktion gehören. Fehlt das Chromatogramm, muss man der genannten Prozentzahl einfach glauben. Beides kommt in der Praxis häufiger vor, als einem lieb ist.

Identität und Reinheit sind zwei verschiedene Fragen

Das ist der am häufigsten übersehene Punkt. Die Reinheitsangabe, etwa „≥ 99 %“, sagt aus, welcher Anteil der Probe aus einer einzigen Substanz besteht. Sie sagt nicht, welche Substanz das ist.

Für diese zweite Frage ist die Massenspektrometrie zuständig: Sie prüft, ob die gemessene Molekülmasse zur erwarteten Sequenz passt. Ein COA, das nur eine HPLC-Reinheit ausweist, belegt also lediglich, dass etwas sehr rein ist. Erst die Kombination aus beiden Messungen belegt, dass das Richtige sehr rein ist.

Wie man ein COA anfordert, und was man fragt

Ein seriöser Anbieter schickt das Prüfprotokoll auf Anfrage, und zwar vor dem Kauf. Wer erst nach der Bestellung liefert oder auf ein allgemeines Musterdokument verweist, hat die Frage nicht beantwortet, sondern umgangen.

• Nach dem COA der Charge fragen, die geliefert wird, nicht nach einem Beispiel. Chargennummern sind der Kern der Sache.
• Fragen, ob das Chromatogramm mitgeliefert wird und nicht nur die Prozentzahl.
• Fragen, welche Salzform vorliegt und ob der Gegenionanteil bestimmt wurde.
• Fragen, ob die Identität massenspektrometrisch bestätigt wurde und nicht nur über die Retentionszeit.
• Nach dem Prüfdatum sehen: ein Dokument von vor zwei Jahren gehört zu einer anderen Charge als der, die im Karton liegt.

Die Chargennummer auf dem Dokument muss sich mit dem Etikett auf dem Pen abgleichen lassen. Das klingt banal, ist aber der einzige Punkt, an dem sich Papier und Produkt wirklich berühren. Stimmt diese Nummer nicht überein, ist alles davor Theorie. Besonders wichtig wird das bei Materialien, die gar kein Einzelmolekül sind: bei einem Extrakt aus Peptidfraktionen lässt sich die Gleichheit von Charge zu Charge nicht auf dieselbe Weise belegen wie bei einer definierten Substanz, und dann ist das Prüfprotokoll der Charge das einzige, was überhaupt etwas aussagt.

Woran man ein schwaches COA erkennt

• Ein Bild statt eines PDFs: ein abfotografiertes Blatt ist nicht überprüfbar.
• Immer dieselbe Reinheitszahl über alle Produkte hinweg: echte Messungen streuen.
• Ein Analysedatum, das älter ist als die Charge.
• Kein Labor genannt, oder nur ein Name ohne Anschrift und Kontaktmöglichkeit.
• Reinheit ohne Identitätsprüfung.

Wie ein Chromatogramm gelesen wird

Der Kern eines COA ist selten die Zahl, sondern das Bild darunter. Bei der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie wird die Probe durch eine Säule gedrückt; Moleküle verlassen die Säule zu unterschiedlichen Zeitpunkten, und ein Detektor zeichnet auf, wann wie viel herauskommt. Das Ergebnis ist eine Kurve mit Gipfeln, den Peaks.

• Der Hauptpeak gehört zur gesuchten Substanz. Seine Fläche im Verhältnis zur Gesamtfläche aller Peaks ergibt den Reinheitswert.
• Die Retentionszeit, also der Zeitpunkt des Peaks, ist ein Fingerabdruck unter den gegebenen Bedingungen. Sie muss zur Referenz passen.
• Nebenpeaks sind Verunreinigungen. Interessant ist weniger ihre Zahl als ihre Lage: Peaks direkt neben dem Hauptpeak deuten auf verwandte Moleküle hin, etwa Sequenzen mit einem fehlenden Rest.
• Eine unruhige Grundlinie oder ein schief zulaufender Peak deuten auf ein Problem mit der Methode oder der Probe hin.

Ein COA, das nur eine Prozentzahl nennt und kein Chromatogramm zeigt, verlangt Vertrauen statt Nachvollziehbarkeit. Das ist der Unterschied zwischen einem Prüfbericht und einer Behauptung im Layout eines Prüfberichts.

Was HPLC nicht misst

Ein hoher Reinheitswert sagt etwas über den Anteil der Hauptsubstanz an allem, was die Säule passiert und vom Detektor gesehen wird. Er sagt nichts über eine ganze Reihe anderer Dinge, und die fehlen auf vielen COAs.

• Wassergehalt: ein lyophilisiertes Peptid zieht Feuchtigkeit. Wasser wird bei der HPLC nicht als Verunreinigung gezählt, verschiebt aber das Gewicht.
• Gegenion: Peptide liegen meist als Acetat oder Trifluoracetat vor. Dieser Anteil kann zweistellig prozentual sein und zählt in der Reinheit nicht mit.
• Endotoxine und mikrobielle Belastung: dafür braucht es eigene Prüfungen, etwa einen LAL-Test.
• Identität: die Retentionszeit ist ein Indiz, ein Nachweis ist sie nicht. Dafür ist Massenspektrometrie da.

Wer misst, ist Teil der Aussage

Ein COA aus dem Labor des Herstellers selbst ist nicht automatisch falsch, aber es ist eine Selbstauskunft. Ein Prüfbericht eines unabhängigen Labors ist stärker, weil das Labor nichts davon hat, wenn die Zahl gut aussieht. Wo beides vorliegt, ist die Sache klar; wo nur die Selbstauskunft existiert, sollte man das wenigstens wissen.

Ein COA beweist nichts über den Anbieter. Es beweist etwas über eine Charge, und nur dann, wenn man nachvollziehen kann, dass es diese Charge ist.

Wer regelmäßig mit Forschungspeptiden arbeitet, legt sich am besten ein simples Verzeichnis an: Chargennummer, Eingangsdatum, COA als Datei daneben. Das kostet zwei Minuten pro Lieferung und ist der Unterschied zwischen einer nachvollziehbaren Versuchsreihe und einer Sammlung von Anekdoten.

Und wenn ein Anbieter auf die Bitte um das COA zu einer bestimmten Charge ausweichend antwortet, ist das bereits die Auskunft. Ein Prüfbericht, der existiert, lässt sich in einer Minute als Datei verschicken; einer, der erst auf Nachfrage entsteht, ist keiner. Diese eine Anfrage vor der ersten Bestellung sagt mehr über eine Bezugsquelle aus als jede Produktbeschreibung.